多肽合成步骤及原理

合生生物多肽合成，示范多肽片段：KALKALKKALKALK 15mg 95%

1.根据理论合生生物计算值称取0.5g（取代度0.3）二氯树脂于30 ml的反应器中，用50ml的DCM浸泡30min,DMF洗涤3次。

2合生生物称取片段第一个氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH 150mg，加入DCM将其溶解，然后加入0.2ml的DIEA反应1.5-2h。

3.2小时后，用甲醇溶液封头（甲醇：DIEA:DCM=1：1：2)半小时，然后用DMF洗涤四次，抽干待用。

4.合生生物向反应器中加入适量的20%哌啶溶液（哌啶/DMF=1:4），反应20 min，以此来脱去Fmoc保护基团。脱完保护后用DMF洗涤四次，然后抽干。

5.合生生物取少量树脂用茚三酮法检测，树脂有颜色，则脱保护成功。

6.合生生物称取片段的C端第二个氨基酸Fmoc-Ala-OH 0.45mmol(第一个氨基酸摩尔量的3倍）和0.45mmol HOBT，加入少量（刚好没过树脂）DMF将其溶解，然后合生生物加入0.2 ml的DIC到反应器中。

7.半小时后，合生生物取少量树脂检测，用茚三酮法检测，若树脂有颜色，则缩合不完全,继续反应；若树脂为无色，则反应完全。

8.待反应完全后，合生生物用DMF洗涤树脂四次，然后抽干，向反应器中加入一定量的20%哌啶（哌啶/DMF=1:4），合生生物脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用DMF洗涤四次，合生生物然后抽干。

9.合生生物取少量树脂用茚三酮法检测，树脂有颜色，说明脱保护成功。

10.合生生物按照步骤7-10依次接上片段1的剩余氨基酸

11.脱去片段1最后一个氨基酸N端的Fmoc保护。

12.切割：合生生物称量反应后的树脂加入10倍体积的切割液，反应1.5-2h（切割液：95%TFA+2%EDT+2%Tis+1%H2O），滤掉树脂，加入4-5倍体积的乙醚离心，去掉上清液，合生生物再用乙醚洗涤三次。

13.合生生物通过高效液相色谱仪器（HPLC）将目标肽段与杂质分离，合生生物将目标肽段冻干成粉末，并送合生生物QC质检

14.QC检测纯度（HPLC）,分子量（MS）均合格后，产品包装发货。