多肽合成的基本知识

1、多肽合成的基本原理是什么？

多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物，合成过程可以连续进行，进而为多肽合成的自动化奠定了基础。目前全自动多肽的合成，基本都是固相合成。其基本过程如下：基于Fmoc化学合成，先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点，同其它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键，不断重复这一过程，即可得到多肽。根据多肽的氨基酸组成不同，多肽后处理方式不同，纯化方式也有差异。

2.多肽定制服务的质量如何控制？

多肽严格按照ISO质量管理体系进行生产，对每条多肽都进行唯一的编号管理，对粗品、纯化收集液以及最终冻干品进行HPLC以及LC/MS检测分析，确保产品的正确性和产品的质量。

3.生物多肽的专业技术以及交货时间如何？

在多肽化学合成技术方面积累了多项国际领先的困难多肽合成技术，能够借助多肽片段合成和多肽连接技术实现了长链多肽的化学合成；掌握高度疏水的膜蛋白片段合成的增溶技术，完全应用化学合成方法实现了目前国际上最长的膜蛋白化学全合成，多次刷新了世界纪录；并且应用替代二硫键的非天然氨基酸技术实现了多肽环化修饰，将使得合成的多肽药物更为稳定。普通多肽可以一周时间交货，大部分可以二周内交货。数量从毫克到公斤级。

4.什么是多肽的净含量（肽含量），它的意义是什么？

干品多肽的重量中不仅仅包含多肽，还包含有一些非肽的组份，如水，被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比，这个百分比的数值范围很大，可能从50%到90%，取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法，不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈，它们是完全不同的两个概念。纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比，而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比，肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中，对计算肽的浓度是很重要的。

5.如何保存合成的多肽？

多肽一般长期保存需要避光保存，并应保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短时间以室温运输。多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前，冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。对于含Cys,Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化，在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题简单的那些肽相比，生命期有限。

6.为什么有些多肽的合成产率或纯度会比较低?

多肽合成与引子合成有比较大的区别，不能合成的引子很少，但是不能合成的多肽经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这些氨基酸比邻或重复时，多肽链在合成过程中不能完全舒展溶解，合成效率下降。以下几种情形，合成效率和产物的纯度都比较低，如：重复Pro,Ser-Ser，重复Asp，4个连续Gly等。

7.如果我的肽纯度是95%，那么，其余的5%都是些什么物质？

多肽的纯度通常是通过HPLC，用每分钟1%的标准乙晴梯度来检测决定的。合成过程中，氨基酸之间的交联效率不是总能达到100%，因而产生一系列的氨基酸缺失的杂质。大多数这样的氨基酸缺失的杂质在纯化过程中都被去掉了，但有少数的杂质其色谱表现与目标多肽很相近。这些氨基酸缺失的杂质肽留在了多肽样品中就构成了余下的几个百分。

8.多肽是如何纯化的?

多肽纯化一般使用反相柱(如C8，C18等)，214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂，pH2.0。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O，Buffer B为1%TFA/ACN/pH2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好，用Buffer B溶解后，然后用Buffer A稀释;对疏水性强的多肽，有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗产物，如果多肽不长(15aa以下)，一般会有主峰，主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽，如果没有主峰，HPLC需搭配Mass来判定分子量，进而确定哪个峰是所要合成的多肽。

9.如何从多肽序列中判定多肽的溶解性?

(1)多肽中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，多肽很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成，都有可能有问题。

(2)一般情况下疏水性氨基酸的比例<50%，不能连续5个连续氨基酸为疏水性，带电荷的氨基酸的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C-terminus)的比例达到20%，在多肽的N或C短如果能增加极性氨基酸，也可以改善溶解性。

10.多肽与其他化合物或者载体接合考虑的因素有那些？

经常有一些多肽需要与一些药物或者特定功能的化合物进行连接，或者要把多肽连接到某些载体上去，需要化学键进行结合，一般多肽具有氨基或羧酸官能团可以考虑下相应的羧酸或氨基进行缩合，另外一种选择是通过巯基（thiol）与马来酰亚胺（Maleimide）在PH 8的环境下连接。多肽中可以通过带有Cys或者Maleimide官能团进行修饰。Maleimide修饰通常可以选择化合物3-Maleimidopropionic Acid(CAS 7423-55-4)实现。